接種、分離、培養(yǎng)

接種、分離、培養(yǎng)是微生物學(xué)實(shí)際工作中應(yīng)用最多的基本技術(shù)方法，也是藥品微生學(xué)檢驗(yàn)中最基本的技術(shù)。這里重點(diǎn)介紹細(xì)菌的接種與分離技術(shù)以及多種培養(yǎng)方法。

接種：是指將含有或可能含有菌細(xì)胞的樣品、或菌細(xì)胞的培養(yǎng)物，種入培養(yǎng)基中的技術(shù)方法。

轉(zhuǎn)種：是指將甲培養(yǎng)基內(nèi)的培養(yǎng)物移種至乙培養(yǎng)基內(nèi)，也是接種。

接種過的培養(yǎng)基置適宜環(huán)境條件中進(jìn)行培養(yǎng)，使菌細(xì)胞生長繁殖。

分離：是指使用一定的接種技術(shù)，將混雜存在的菌細(xì)胞盡可能地在培養(yǎng)基中分開而散在生長，能獲得單一的一種菌株的方法。

檢驗(yàn)工作是要求分離出待檢菌（或稱為目的菌)，供作鑒定。例如藥品的大腸埃希氏桿菌檢驗(yàn)，就是從口服藥品中分離出可疑是該菌的菌株，使成純培養(yǎng)物來作鑒定。

分離法也用于活菌計(jì)數(shù)，例如藥品細(xì)菌總數(shù)的測定、霉菌和酵母菌總數(shù)的測定，就是盡可能使樣品中的菌細(xì)胞在平板培養(yǎng)基上分離散開，各自長出菌落，以每個(gè)菌落代表一個(gè)菌細(xì)胞，計(jì)數(shù)菌落而測定出所含的活菌數(shù)。用于分離的培養(yǎng)基經(jīng)接種后，置于適宜環(huán)境條件中培養(yǎng)，稱為分離培養(yǎng)。

接種和分離所使用的工具，最常用的是接種環(huán)和接種針，是由一絕熱的電木柄中的金屬棒，連接上70 mm長的鎳鉻合金絲或白金絲制成。接種針的絲應(yīng)筆直而無任何彎曲；接種環(huán)是將接種針的頂端扭成3 mm直徑的正圓形封閉環(huán)而成。

接種和分離技術(shù)，一般是在潔凈室內(nèi)的超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，為嚴(yán)格的無菌操作。

凡已接種過的培養(yǎng)基，均要在適宜的環(huán)境條件中進(jìn)行培養(yǎng)。適宜的環(huán)境條件是指溫度、濕度、培養(yǎng)的時(shí)間，尤以對氧與二氧化碳的需要情況等因素要適宜。根據(jù)待檢菌的不同，有不同的培養(yǎng)方法。例如口服藥品的大腸埃希氏桿菌檢驗(yàn)、沙門菌檢驗(yàn)，是用需氧培養(yǎng)；用于陰道、創(chuàng)傷、潰瘍的破傷風(fēng)桿菌檢驗(yàn)，要用厭氧培養(yǎng)。