微生物實驗技術(shù)之細(xì)菌的接種、分離、培養(yǎng)（八）
發(fā)布時間:2021-12-15瀏覽：1488
分離技術(shù)-傾注分離法
傾注分離法 用于藥品、食品等樣品的活菌計數(shù)，也用于分離純一的菌株。
將樣品的混懸液或培養(yǎng)的菌液，經(jīng)一系列稀釋，選幾個不同濃度的稀釋液，用無菌吸管吸取1ml，注入無菌平皿內(nèi)。再將熔化后再冷卻至40~45℃的營養(yǎng)瓊脂約15ml，傾注平皿內(nèi)，立即轉(zhuǎn)動平皿，使接種液與培養(yǎng)基充分混合均勻，待靜置凝固，倒置培養(yǎng)。
通常是對連續(xù)的幾個稀釋度，例如10-2、10-3、10-4，各作2～3個傾注分離，利于活菌的計數(shù)測定，也為選取待檢菌菌落提高機(jī)率。培養(yǎng)后，在平板上長出的菌落數(shù)，應(yīng)隨稀釋倍數(shù)遞減而由多至少。此法作為分離待檢菌的缺點是操作偏繁，費時，而且菌落除在表面生長外，培養(yǎng)基內(nèi)部也長，同為一種細(xì)菌在這兩處的菌落形態(tài)特征有不同，如何識別長在培養(yǎng)基內(nèi)部而在表面沒有的某個菌落即是待檢菌菌落，就很困難。
不論是劃線分離、涂布分離、傾注分離，凡接種過的平板培養(yǎng)基，一律要翻轉(zhuǎn)作倒置培養(yǎng)，倒置的作用是減少水分的蒸發(fā)和防止污染。
平板培養(yǎng)基上菌落的生長現(xiàn)象，因待檢菌的不同和所用的平板也多不相同，但均可呈現(xiàn)一定的菌落特征。對經(jīng)常要作檢驗的一些致病菌菌落特征，充分地掌握，才有把握從一個樣品內(nèi)分離出的多種多樣的菌落之中，識別和挑取待檢菌菌落。否則，即使分離出待檢菌菌落，因不善識別，必然發(fā)生錯誤的選擇和挑取，導(dǎo)致漏檢。